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天昊生物开发的微生物Accu16S®细菌与AccuITSTM真菌绝对定量测序技术，就是一种基于添加内标序列的微生物绝对定量检测方法。本技术通过向样品DNA中添加天昊专利的人工合成已知拷贝数内标序列，然后进行16S/ITS扩增子文库构建、测序，再根据内标序列reads数及其绝对拷贝数绘制出标准曲线，最后可获得样品中OTU代表序列对应的细菌物种绝对拷贝数。利用该方法，我们可以同时获得绝对定量分析结果、常规扩增子相对定量结果，以及相对定量与绝对定量的比较分析结果，可谓“一次检测，三套结果”，数据更加全面准确。
天昊生物绝对定量专利授权书
1、只能获得相对定量结果，可能推导出错误结论；
2、传统qPCR等方法定量费时费力，无法避免跨平台系统误差；
3、针对特殊样本，无法排除PCR抑制剂干扰。
上图为微生物群“相对丰度(Relative abundance)”和“绝对丰度(Absolute abundance)”随时间变化比较示意图。只检测相对定量数据会掩盖了潜在微生物群落的动态变化，使变化过程中的差异更难被发现。（图片来源：Nature，2021）
上图为人类肠道菌群变化与微生物定量方法之间存在差异。本研究发现克罗恩氏病患者（CD）和对照人群（Control）粪便微生物的“相对丰度(RMP)”和“绝对丰度(QMP)”结果，在一些菌属中存在显著性差异。只考虑“相对定量”结果，可能会造成结论的错误或者关键菌属信息的丢失。（图片来源：Nature，2017）
一次检测，三套数据，结果更丰富；
对样本的需求量要求低，避免因样本无备份等造成的无法检测情况；
检测通量高，检测合格范围内各类菌种均可绝对定量；
相对定量和绝对定量数据相互印证，减少传统相对定量假阳性问题；
避免跨平台qPCR定量的系统误差；
内标法比qPCR在定量上具有更高的特异性、灵敏度和更好的一致性；
避免因样本DNA抽提等原因造成的PCR抑制剂残留对结果准确性的影响；
避免qPCR等定量实验碰到的引物设计和优化难题。
截至目前，天昊客户利用微生物绝对定量测序共发表SCI文章51篇，其中JCR分区在Q1区的高分文章多达26篇，研究领域涉及医学、环境、食品、农学和生态等各个领域，样本类型包括人类及动物粪便、土壤、体外发酵液、水体生物膜、酒类发酵物及口拭子DNA样本等。
官方网址：http://www.geneskybiotech.com
往期相关链接：
Nature Biotechnology强烈建议微生物组要用“绝对定量”，指出当前研究未普及微生物组绝对定量检测是“不幸的”；
